操作步驟:

實(shí)驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗結(jié)果有效性，每次實(shí)驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品名稱：檸檬酸(CA)含量試劑盒(酶法)科研

規(guī)格：24樣 48樣 48樣 96樣

貨號：AS272

檢測方法：紫外分光光度法 紫外分光光度法 微板法 微板法

產(chǎn)品分類：呼吸代謝途徑系列

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個月。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實(shí)驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗流程，避免實(shí)驗

樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

Goat Anti-Chicken IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.5ml

RCS1/FAM64A  染色體分離調(diào)節(jié)1抗體 規(guī)格: 0.2ml

M-RAS/Mras  原基因M-ras抗體 規(guī)格: 0.1ml

BST1/CD157  骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原1抗體 規(guī)格: 0.2ml

KLK10  激肽釋放10抗體 規(guī)格: 0.1mlPKA/PKAcat/PKACB  激A抗體 規(guī)格: 0.1ml

VGLL4  轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-horse IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml

CKLFH8/CMTM8  趨化樣因子超家族成員8抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-MYF5 (phospho Ser49)  磷化生肌決定因子Myf5抗體 規(guī)格: 0.1ml

NMDA-NR1/NR1/NMDAR1  天冬氨受體抗體 規(guī)格: 0.1mlMIER2  中胚層誘導(dǎo)早期反應(yīng)2抗體 規(guī)格: 0.2ml

檸檬酸(CA)含量試劑盒(酶法)科研蛋白質(zhì)A標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

HRP標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

AP標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

TRITC標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

Cy2標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

Cy3標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

Cy5標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

EGFP標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升

免疫抗體標(biāo)記/內(nèi)參－抗試劑專題  

GST（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）  100微升